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TEM常规生物样品制样方法

文字:[大][中][小] 手机页面二维码 2017/11/15     浏览次数:    



提示1:若制样室没有除湿设备,最好选择空气相对干燥时制样。

提示2:请提前1h把纯包埋剂放入干燥柜中回温,以备渗透和包埋用。

1、取样。所取样品应尽可能小,约一个芝麻粒大小为宜。这个过程最好在冰上操作,并且尽可能快。

2、固定。将样品放入装有2.5%的戊二醛的EP管中,4℃过夜。

3、清洗。吸出固定液,加入0.1M的PB,缓慢摇晃15min,重复两次。

4、后固定。用1%锇酸(约2-3滴)室温固定1.5h。

5、清洗。重复步骤3的操作。

6、脱水。依次用30%、50%、70%、80%、95%和100%的乙醇逐级脱水15 min,期间缓慢摇晃。其中在70%乙醇中可以4℃过夜,100%乙醇重复一次。

7、渗透。用100%的丙酮替换乙醇两次,每次15min,期间缓慢摇晃;用1:1(Epon812:丙酮)缓慢摇晃渗透2-3h(酵母菌难渗透之类最少4h),后换成纯Epon812 过夜,(难渗透至少24h)。

8、包埋。将样品转移至包埋槽,加入适量Epon812调整样品位置,放置60℃烘箱48h聚合。

9、切片。粗修,使样品刚暴露出来,切面光滑。精修,将样品块修成梯形,宽约300μm为宜,然后用钻石刀切厚度为70nm的切片,选用合适的铜网捞取颜色均匀的亮灰色切片。

10、染色。2%的醋酸双氧铀水溶液染色室温下染色10-20min;柠檬酸铅染色5-10min。铅染时要防止二氧化碳污染,染色前离心染液,染色过程中在染色盘周围放置适量固体氢氧化钠,同时操作过程中屏住呼吸。

11、电镜观察拍照。




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