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在呈现图像结果时,颜色效果也是很重要的一环,那么ImageJ/FIJI中有哪些实用的颜色设置操作呢?
“真彩”和“伪彩”
处理彩色图像之前,需要区分“真彩”和“伪彩”。如图1示,在图像信息栏中,左边的“伪彩”图像中显示为8bit或者16bit,其中每个像素点关联的信息为某个通道的灰度值,颜色只是显示效果;右边的“真彩”图显示的则为RGB(或者CMYK)模式,其每个像素点关联的信息则为多原色的信息,对应红(R)绿(G)蓝(B)三个通道的灰度值。
图1 “真彩”和“伪彩”
单色图像的LUTs显示
LUTs是Look-Up-Table的简称,实际上就是一张像素灰度值的映射表,经过一系列的计算可以变成了另外一个与之对应的灰度值或颜色(梯度),目的是为了突出特定图像信息。一般来说,我们直接得到的荧光图片都是灰度图,其在在软件中所呈现的颜色是“伪彩”,可在ImageJ/FIJI中使用LUTs工具来改变其显示。打开LUTs Tables(Image --> Color --> Display LuTs)即可看到Look-Up-Table中每一项LUTs设置对应的颜色(如图2)。
图2 Look-Up-Table
如图3示,可以通过LUTs将荧光图像设为不同的颜色(Blue、Grays)和反相图(Invert LUT).
图3 单色LUTs示例
有时,图像信息展示时需要体现荧光亮度分布,可以使用Red Hot等多色模式,也可通过Analysis --> Tools --> Calibration Bar添加色彩过渡标尺(如图4)。常用的LUTs有Fire、Red Hot、Spectrum、Rainbow RGB和HiLO,感兴趣的同学可以去试试,看这些显示方式分别适合于哪些数据呈现。
图4 展现荧光亮度分布示例
多色图像的LUTs显示
我们经常需要通过叠加不同通道的荧光图像来展现特定目标的分布和表达,可以通过以下两种不同的叠加方式来进行。
(1) 直接生成RGB图:如图5,Image --> Color --> Merge Channels,左下角选项只选中keep sourse images,于是得到“真彩”图。
图5 多通道叠加(RGB)
(2) 生成多色显示效果(multi-color LUTs):如图6,Image --> Color --> Merge Channels,左下角选项选中Creat composite,于是我们得到各通道独立的“伪彩”图。
图6 多通道叠加(LUTs)
第二种叠加模式又可使用Channel Tools工具(Image-->Color-->Channel Tools)改变需要叠加的通道,并可以通过Brightness/Contrast来调节各通道的显示,这种处理方式对得到漂亮的结果非常实用。待图像效果调节完毕后,可以通过Image-->Type-->RGB Colour将图像转化为RGB格式并保存。
上述叠加方式主要针对7通道以内的图像,如需叠加更多的通道需要借助于STACK功能实现,我们会在稍后的专题中提到。
本信息出自于 SLST分子影像平台 微信公众号
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